Estudios Enzimáticos

ESTUDIOS ENZIMÁTICOS

 1) Hidrólisis enzimática del almidón por la saliva: Acción digestiva de la amilasa salivar.

FUNDAMENTO

• Lo que ocurre en este proceso es que el lugol se intercala por la molécula de almidón y esto se detecta por la coloración violeta-azulada que toma la mezcla. El almidón es un polisacárido que se encuentra en los amiloplastos de las células vegetales, sobre todo en las semillas, las raíces y los tallos. También aparece en algunos protistas. Realmente esta compuesto por dos tipos de moléculas: la amilosa, siendo ésta a la que se pega el lugol en frío, por lo que es la que se tiñe de azul-violeta; y por la amilopectina. Realmente no se trata de una reacción química sino de una absorción.
• La saliva contiene una enzima hidrolasa que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples. Se produce principalmente en las glándulas salivares, se trata de la enzima amilasa. Cuando el almidón es degradado, se obitiene glucosa, dextrosa y fragmentos de otros azucares.

TÉCNICA

• Primero se hace un tubo patrón con 2ml de una disolución de almidón al 2 % y unas gotas de disolución de yodo (lugol). Observar el resultado. Después se calienta suavemente el tubo hasta que la mezcla pierda el color. Dejar enfriar el tubo bajo el agua del grifo y esperar unos minutos. Anotar lo sucedido.

• Colocar en un segundo tubo 2ml de la disolución de almidón y una cierta cantidad de saliva, mezclar bien la saliva con la disolución y calentar muy suavemente durante unos segundos. Añadir unas gotas de lugol. Anotar los resultados y dar una explicación a lo ocurrido.

RESULTADOS OBTENIDOS

Al añadirle lugol al almidón pudimos observar como realmente adquiría una coloración azul-violeta por la absorción entre la amilosa y el lugol. Al calentarlo perdía el color ya que la absorción solo se produce en frío. Por tanto cuando luego lo dejamos enfriar, volvió esa coloración características del principio.
Al mezclar el almidón con la saliva, la enzima amilasa es la encargada de degradarlo. Si luego le añadimos lugol seguimos observando esa coloración azul-violeta del experimento anterior puesto que se ha vuelto a producir la absorción entre el lugol y la amilosa del almidón.

2) Reconocimiento de la enzima catalasa en tejidos.

FUNDAMENTO

                 La catalasa es una enzima que se encuentra tanto en tejidos vegetales (patata, zanahoria, lechuga, ect.) como en tejidos animales (carne, pescado, etc.) produciendo la siguiente reacciñon química:  H2O2 (agua oxigenada) -----> H2O + 1/2O2 (gaseoso). 

              Es decir, la enzima descompone el peróxido de hidrógeno o agua oxigenada en agua y oxígeno gaseoso, que se desprenderá en forma de burbujas en un medio acuoso.

                  Sin embargo, si sometemos la catalasa a altas temperaturas podremos comprobar una propiedad fundamental de las proteínas, que es la desnaturalización. Como la catalasa es químicamente una proteína, cuando hervimos los tejidos vegetales o animales en los que ésta está presente, provocaremos su desnaturalización. Al perder la estructura terciaria, perderá también la función y como consecuencia su función catalítica, por lo que no podrá descomponer el agua oxigenada y no se observará ningún tipo de reacción cuando hagamos la experiencia anterior con muestras de tejidos hervidos. Por tanto, no observaremos burbujas procedentes del oxígeno gaseoso desprendido cuando la catalasa descomponía el agua oxigenada.  

TÉCNICA

• Poner e varios tubos de ensayo previamente numerados distintos tejidos (más o menos el mismo peso de cada tejido).
• Añadir 5ml de agua oxigenada a cada tubo y anotar lo que sucede.
• Explicar lo ocurrido y ordenar los tejidos según su actividad.
• Repetir el proceso anterior, pero hervir antes los tejidos durante diez minutos. 
• Explicar los resultados obtenidos.

RESULTADOS OBTENIDOS

      Pusimos en 5 tubos de ensayo 21,91 gramos de : zanahoria, hígado, pimiento, habichuelas verdes y apio (cada tejido en un tubo de ensayo).

      Al añadirle peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) observamos que efectivamente burbujeaban todos, unos menos que otros. Esto se debe a que todos esos tejidos contienen la enzima catalasa y al añadirle agua oxigenada se produce la reacción ya citada anteriormente, obteniéndose agua y oxígeno gaseoso que es el responsable de la aparición de esas burbujas, debido a que se desprende de esa manera.

     Si repetimos el proceso pero hirviendo los tejidos antes durante diez minutos provocaremos la desnaturalización de la catalasa y por tanto se perderá su función catalítica, no descompondrá el agua oxigenada en agua y oxígeno gaseoso y por tanto no se observaran burbujas cuando a los tejidos vegetales y animales previamente hervidos le añadamos agua oxigenada.